Efecto de dos fitohormonas en la fase de introducción de la orquídea Epidendrum Sp bajo condiciones in vitro

Abstract

Ecuador es reconocido por poseer una gran diversidad de orquídeas, sin embargo, muchas de las especies que existen en su territorio (al igual que sucede en otras partes del mundo) están en peligro de extinción. La deforestación ha provocado serios daños especialmente en las poblaciones de orquídeas epífitas, las cuales, al ser tan especializadas en su ecología, se ven seriamente afectadas por los cambios ambientales.

El objetivo del presente trabajo fue establecer un protocolo para el cultivo inicial de la orquídea Epidendrum sp., mismo que consiste en obtener la desinfección adecuada, para los segmentos nodales y observar la respuesta de estos sometidos a diferentes dosis de fitohormonas.

La investigación se desarrolló durante el año 2009, en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la Facultad de Ingeniería en Ciencias Agropecuarias y Ambientales de la Universidad Técnica del Norte, ubicado en la Provincia de Imbabura, Cantón Ibarra, Parroquia Caranqui, a una altitud de 2 254 msnm.

El trabajo comprendió dos partes. En la primera se determinó el Protocolo de desinfección para segmentos de tallo. El 85% de eficiencia correspondió a la combinación de 50 ml/l de jabón líquido durante por 30 minutos; inmediata inmersión por 20 minutos en solución de 15ml/l de Tween® 20; y, lavado con una solución de 1000 mg/l de Captan® 80, durante 5 minutos. Dentro de la cámara de flujo laminar se utilizó alcohol al 70% y agua oxigenada al 3% por un minuto; y, enjague con agua estéril por dos minutos, en tres ocasiones. En la segunda parte, se probaron seis tratamientos en dosis combinadas de la auxina ácido naftalenacético (ANA) y la citoquinina 6-bencilaminopurina (BAP) en diferentes concentraciones incluyendo el testigo sin fitohormonas. Se utilizó el Diseño Completamente al Azar (DCA) para evaluar las variables: longitud de la yema y porcentaje de sobrevivencia y el Diseño Bloques Completos al Azar (DBCA) para la variable número de tubos contaminados. Se realizaron diez repeticiones y cuatro tubos de ensayo por unidad experimental. Cuando se encontraron diferencias significativas se utilizó la prueba de Tukey al 5%.

Los segmentos nodales preparados dentro de la cámara de flujo laminar, se insertaron en medio de cultivo; los tubos de ensayo se sellaron con plástico osmótico y se trasladaron al cuarto de incubación alternando 16 horas luz con ocho de oscuridad a una temperatura de 25º C.

El ADEVA detectó diferencias significativas al 1% en la variable Número de tubos contaminados debidas a bloques (días). Al no encontrar diferencias entre tratamientos, se concluyó que los componentes del medio no influyen en la contaminación. En la variable Longitud de yemas se detectaron diferencias significativas atribuidas a tratamientos. T4 (1.5mg/l BAP x 2.0mg/l ANA) alcanzó la media más alta con 1,33cm de longitud y la presencia de raíces, obteniéndose de esta forma una vitro-planta completa. En cuanto a la Sobrevivencia de los segmentos nodales, no se detectaron diferencias significativas. T4 obtuvo el 100% de sobrevivencia.

Se recomienda utilizar el Protocolo de desinfección desarrollado, para estudios de multiplicación in vitro de Epidendrum sp. y otras orquídeas; probar la longitud de los segmentos nodales para el proceso de incubación; evaluar el comportamiento de la vitroplanta en las fases de micropropagación y acondicionamiento ex –vitro; y, asegurar la idoneidad del material a utilizar, mediante la ejecución de un programa de desinfección de plantas madre.